008240612s2021      us  |||||||||||||||c||eng  d
■001000016931022
■00520240214095855
■006m          o    d                
■007cr#unu||||||||
■020    ▼a9798380621281
■035    ▼a(MiAaPQ)AAI28718055
■040    ▼aMiAaPQ▼cMiAaPQ
■0820  ▼a610
■1001  ▼aMourdoukoutas,  Antonios  P.
■24510▼aMicroscale  Tools  for  Improved  Analytical  Sensitivity  and  Throughput  in  Single-Cell  Immunoblotting▼h[electronic  resource]
■260    ▼a[S.l.]:▼bUniversity  of  California,  Berkeley.  ▼c2021
■260  1▼aAnn  Arbor  :▼bProQuest  Dissertations  &  Theses,  ▼c2021
■300    ▼a1  online  resource(144  p.)
■500    ▼aSource:  Dissertations  Abstracts  International,  Volume:  85-04,  Section:  B.
■500    ▼aAdvisor:  Herr,  Amy  E.
■5021  ▼aThesis  (Ph.D.)--University  of  California,  Berkeley,  2021.
■506    ▼aThis  item  must  not  be  sold  to  any  third  party  vendors.
■520    ▼aProteins  drive  nearly  all  cellular  processes,  and  direct  quantitation  of  protein  abundance  from  single-cells  is  essential  to  understanding  heterogeneous  cell  states.  Immunoassays  are  widely  accepted  tools  for  performing  single-cell  protein  detection,  but  protein  detection  by  immunoaffinity  alone  is  insufficient  for  precision  protein  characterization,  as  proteins  with  similar  binding  kinetics  can  have  different  biological  impacts,  including  in  disease.  To  provide  a  cross-validation  tool  for  protein  characterization,  electrophoretic  cytometry  immunoassays  have  been  developed  to  characterize  proteins  by  both  immunoaffinity  and  molecular-mass  through  electrophoresis.  Central  to  these  assays  performance  is  a  multifunctional  gel  matrix  that  acts  as  a  protein  sieving  matrix  during  electrophoresis  and  a  protein  scaffolding  matrix  during  in-gel  immunoblotting.  In-gel  immunoblotting  of  target  proteins  is  widely  accomplished  by  diffusively-driven  immunoprobing,  yet,  this  detection  strategy  suffers  from  reduced  probe  access  to  in-gel  immobilized  proteins  via  size-exclusion  partitioning.  Specifically,  reduced  probe  delivery  to  the  gel  matrix  in  which  target  proteins  are  immobilized  both  (i)  adversely  impacts  equilibrium  immunocomplex  formation  and  thus  protein  detection  sensitivity  and  (ii)  extends  overall  assay  run  time.In  this  dissertation,  to  improve  the  analytical  detection  capabilities  and  improve  assay  throughput  in  electrophoretic  cytometry  assays,  we  present  methods  to  enhance  immunoprobe  delivery  to  hydrogel  matrices,  we  introduce  an  assay  design  to  improve  throughput  in  single-cell  immunoblotting,  and  we  investigate  reengineered  sample  handling  designs  for  reduced  protein  losses  before  immobilization.Overall,  we  apply  fundamentals  in  materials  science,  transport  and  reaction  phenomena,  and  engineering  design  principles  for  the  advancement  of  targeted  protein  detection  assays.  We  see  these  advancements  as  contributing  to  the  broader  goal  of  improving  our  understanding  of  cell-state  in  healthy  and  disease  conditions.
■590    ▼aSchool  code:  0028.
■650  4▼aBioengineering.
■650  4▼aPhysiology.
■650  4▼aOncology.
■650  4▼aImmunology.
■653    ▼aCellular  processes
■653    ▼aSingle-cells
■653    ▼aImmunoblotting
■653    ▼aMicroscale  tools
■690    ▼a0202
■690    ▼a0992
■690    ▼a0982
■690    ▼a0719
■71020▼aUniversity  of  California,  Berkeley▼bBioengineering.
■7730  ▼tDissertations  Abstracts  International▼g85-04B.
■773    ▼tDissertation  Abstract  International
■790    ▼a0028
■791    ▼aPh.D.
■792    ▼a2021
■793    ▼aEnglish
■85640▼uhttp://www.riss.kr/pdu/ddodLink.do?id=T16931022▼nKERIS▼z이  자료의  원문은  한국교육학술정보원에서  제공합니다.
■980    ▼a202402▼f2024