008240612s2023      us  |||||||||||||||c||eng  d
■001000016933214
■00520240214101219
■006m          o    d                
■007cr#unu||||||||
■020    ▼a9798379907877
■035    ▼a(MiAaPQ)AAI30526154
■040    ▼aMiAaPQ▼cMiAaPQ
■0820  ▼a610
■1001  ▼aBerckmueller,  Kurt.
■24510▼aDeveloping  Targeting  Techniques  for  the  Advancement  of  In  Vivo  Gene  Therapies▼h[electronic  resource]
■260    ▼a[S.l.]:▼bUniversity  of  Washington.  ▼c2023
■260  1▼aAnn  Arbor  :▼bProQuest  Dissertations  &  Theses,  ▼c2023
■300    ▼a1  online  resource(79  p.)
■500    ▼aSource:  Dissertations  Abstracts  International,  Volume:  85-01,  Section:  B.
■500    ▼aAdvisor:  Kiem,  Hans-Peter.
■5021  ▼aThesis  (Ph.D.)--University  of  Washington,  2023.
■506    ▼aThis  item  must  not  be  sold  to  any  third  party  vendors.
■520    ▼aHematopoietic  Stem  Cell  (HSC)  gene  therapy  is  a  promising  route  to  curing  patients  with  a  variety  of  hematologic  diseases  and  disorders.  HSC  gene  therapy  is  currently  performed  ex  vivo  and  requires  rare  cleanroom  infrastructure,  which  is  a  significant  obstacle  to  patients  in  resource  impoverished  areas.  Application  of  gene  therapy  agents  directly  in  the  patient  (in  vivo)  would  overcome  this  bottleneck.  We  have  previously  identified  the  CD34+CD90+  subset  to  be  exclusively  responsible  for  short-  and  long-term  engraftment.  However,  purification  and  enrichment  of  this  subset  is  laborious  and  expensive.  HSC-specific  delivery  agents  for  the  direct  modification  of  rare  HSCs  are  currently  lacking.  Here,  we  developed  novel  targeted  viral  vectors  to  specifically  transduce  CD90-expressing  HSCs.  Anti-CD90  single  chain  variable  fragments  (scFvs)  were  engineered  onto  measles-  and  VSVG-pseudotyped  lentiviral  vectors  that  were  knocked  out  for  native  targeting.  We  further  developed  a  custom  hydrodynamic  titration  methodology  to  assess  the  loading  of  surface-engineered  capsids,  measure  antigen  recognition  of  the  scFv,  and  predict  the  performance  on  cells.  Engineered  vectors  formed  with  minimal  impairment  in  the  functional  titer  maintained  their  ability  to  fuse  with  the  target  cells  and  showed  highly  specific  recognition  of  CD90  on  cells  ex  vivo.  Most  importantly,  targeted  vectors  selectively  transduced  human  HSCs  with  secondary  colony-forming  potential.  However,  agents  recognizing  only  a  single  marker  on  target  cells  are  often  insufficient  due  to  epitope  sharing  in  between  on-  and  off-target  tissues.  The  Baker  Lab  previously  designed  a  system  of  protein  switches  known  as  Co-LOCKR,  which  enable  the  specific  recognition  of  two  antigens  simultaneously.  Co-LOCKR  targeted  CAR  T  cells  highly  specifically  killed  tumor  cells  in  vitro  with  virtually  no  off-target  effects.  Therefore,  we  further  designed  and  evaluated  Co-LOCKR-targeted  viral  vectors  for  ex  vivo  as  well  as  in  vivo  applicability  and  comprehensively  evaluated  the  on-target  specificity  in  a  murine  tumor  model.  Together  this  work  lays  a  foundation  and  provides  a  robust  toolset  for  the  exploration  of  in  vivo  gene  therapies.
■590    ▼aSchool  code:  0250.
■650  4▼aBiomedical  engineering.
■650  4▼aCellular  biology.
■650  4▼aGenetics.
■653    ▼aCell  therapy
■653    ▼aGene  therapy
■653    ▼aMolecular  targeting
■653    ▼aHematopoietic  Stem  Cell
■653    ▼aLong-term  engraftment
■690    ▼a0541
■690    ▼a0379
■690    ▼a0369
■71020▼aUniversity  of  Washington▼bMolecular  Medicine  and  Mechanisms  of  Disease.
■7730  ▼tDissertations  Abstracts  International▼g85-01B.
■773    ▼tDissertation  Abstract  International
■790    ▼a0250
■791    ▼aPh.D.
■792    ▼a2023
■793    ▼aEnglish
■85640▼uhttp://www.riss.kr/pdu/ddodLink.do?id=T16933214▼nKERIS▼z이  자료의  원문은  한국교육학술정보원에서  제공합니다.
■980    ▼a202402▼f2024