008240612s2023      us  |||||||||||||||c||eng  d
■001000016935343
■00520240214101921
■006m          o    d                
■007cr#unu||||||||
■020    ▼a9798380807425
■035    ▼a(MiAaPQ)AAI30690334
■040    ▼aMiAaPQ▼cMiAaPQ
■0820  ▼a574.191
■1001  ▼aSegal,  Maya  Adital.
■24510▼aMethods  Development  Toward  Non-Equilibrium  Studies  of  Transcription  Initiation  by  E.  coli  RNA  Polymerase▼h[electronic  resource]
■260    ▼a[S.l.]:▼bUniversity  of  California,  Los  Angeles.  ▼c2023
■260  1▼aAnn  Arbor  :▼bProQuest  Dissertations  &  Theses,  ▼c2023
■300    ▼a1  online  resource(177  p.)
■500    ▼aSource:  Dissertations  Abstracts  International,  Volume:  85-05,  Section:  B.
■500    ▼aAdvisor:  Weiss,  Shimon.
■5021  ▼aThesis  (Ph.D.)--University  of  California,  Los  Angeles,  2023.
■506    ▼aThis  item  must  not  be  sold  to  any  third  party  vendors.
■520    ▼asingle-molecule  FRET  (smFRET)  is  a  powerful  technique  used  for  studying  nanometer-scale  dynamics  of  individual  molecules.  In  solution-based  smFRET,  it  is  possible  to  investigate  intra-  and  intermolecular  conformations,  binding  and  unbinding  events,  and  conformational  changes  under  biologically  relevant  conditions  without  ensemble  averaging.  However,  traditional  single-spot  smFRET  measurements  in  solution  are  inherently  time-consuming.In  this  study,  I  present  a  high-throughput  smFRET  approach  that  overcomes  the  limitations  of  single-spot  measurements.  This  method  utilizes  a  multispot  confocal  geometry,  where  excitation  spots  are  optically  coupled  to  two  custom  silicon  Single  Photon  Avalanche  Diode  (SPAD)  arrays.  By  implementing  Periodic  Acceptor  Excitation  (PAX),  two-color  excitation  is  achieved,  which  allows  differentiation  between  singly-  and  doubly-labeled  molecules,  in  a  process  called  molecular  sorting.  By  pooling  data  from  multiple  confocal  spots,  I  demonstrate  the  ability  of  this  setup  to  rapidly  identify  molecular  subpopulations  and  accurately  determine  their  associated  FRET  efficiencies.Furthermore,  this  high-throughput  approach  enhances  the  temporal  resolution  of  single  molecule  FRET  population  characterization  from  minutes  to  seconds.  When  combined  with  microfluidics,  this  methodology  opens  doors  for  real-time  kinetic  studies  and  efficient  molecular  screening  applications.By  employing  this  high-throughput  smFRET  technique,  I  aim  to  advance  our  understanding  of  single-molecule  dynamics  and  facilitate  a  wide  range  of  biophysical  investigations  in  various  fields.
■590    ▼aSchool  code:  0031.
■650  4▼aBiophysics.
■650  4▼aChemistry.
■650  4▼aPhysical  chemistry.
■653    ▼asingle-molecule  FRET
■653    ▼aPeriodic  Acceptor  Excitation
■653    ▼aSingle  Photon  Avalanche  Diode
■653    ▼aNon-equilibrium
■690    ▼a0786
■690    ▼a0485
■690    ▼a0494
■71020▼aUniversity  of  California,  Los  Angeles▼bChemistry  0153.
■7730  ▼tDissertations  Abstracts  International▼g85-05B.
■773    ▼tDissertation  Abstract  International
■790    ▼a0031
■791    ▼aPh.D.
■792    ▼a2023
■793    ▼aEnglish
■85640▼uhttp://www.riss.kr/pdu/ddodLink.do?id=T16935343▼nKERIS▼z이  자료의  원문은  한국교육학술정보원에서  제공합니다.
■980    ▼a202402▼f2024