MARC

 008260203s2023        us                              c    eng  d
■001000017366030
■00520260209102930
■006m          o    d                
■007cr#unu||||||||
■020    ▼a9798290913735
■035    ▼a(MiAaPQ)AAI30567750
■040    ▼aMiAaPQ▼cMiAaPQ
■0820  ▼a615
■1001  ▼aGe,  Peng.
■24510▼aDevelopment  of  Bioassays  Engaging  Principal  Protein  Targets  in  the  Diagnostic  and  Mechanistic  Studies  of  Parkinson's  Disease  and  Tuberculosis
■260    ▼a[Sl]▼bUniversity  of  Minnesota▼c2023
■260  1▼aAnn  Arbor▼bProQuest  Dissertations  &  Theses▼c2023
■300    ▼a182  p
■500    ▼aSource:  Dissertations  Abstracts  International,  Volume:  87-02,  Section:  B.
■500    ▼aAdvisor:  Aldrich,  Courtney  C.
■5021  ▼aThesis  (Ph.D.)--University  of  Minnesota,  2023.
■520    ▼aThe  aggregation  of  the  α-synuclein  protein  (⍺S)  is  associated  with  the  development  of  Parkinson's  Disease  (PD),  the  second  most  common  neurodegenerative  diseases.  Misfolded  ⍺S  adopts  numerous  quaternary  structures  with  diverse  functions,  but  also  inherently  unstable  ex  vivo.  Naturally  occurring  autoantibodies  targeting  these  aggregates  are  suggested  as  potential  biomarkers  in  the  early  stages  of  PD,  offering  potential  assistance  in  its  diagnosis.  Chapter  1  describes  a  multiplexed,  easy-to-operate  immunoassay  that  is  generally  applicable  to  quantify  the  levels  of  amyloid  proteins  and  their  binding  partners,  named  Oxaziridine-Assisted  Solid-phase  Immunosorbent  (OASIS)  assay.  The  hydrophilic  PEG  scaffold  which  this  assay  was  built  upon  can  inhibit  aggregate  nucleation,  potentially  reducing  assay  variance  which  was  a  "pain-point"  in  the  field.  We  validated  the  novel  OASIS  assay  platform  with  patient-derived  samples  where  levels  of  naturally  occurring  antibodies  against  αS  monomer  and  oligomers  were  measured  in  PD  and  healthy  donors.  The  OASIS  assay  is  anticipated  to  be  highly  valuable  for  research  endeavors  focused  on  comprehending  the  mechanisms  of  protein  misfolding,  its  associated  pathology,  and  the  symptoms  observed  in  Parkinson's  Disease  (PD)  and  other  neurodegenerative  disorders.  There  is  increasing  evidence  showing  that  αS  oligomers  confer  toxicity  through  a  variety  of  mechanisms  that  may  explain  heterogeneity  in  patient  symptomology.  Studies  to-date  have  focused  on  high  molecular  weight  αS  oligomers  because  methods  to  stabilize  and  isolate  low-molecular  weight  αS  oligomers  have  not  been  widely  accessible.  We  hypothesize  that  mechanistic  heterogeneity  is  due  to  the  action  of  a  single  predominant  αS  oligomer  structural  isoform.  In  Chapter  2,  a  bio-orthogonal  photo-oxidative  coupling  method  (PICUP)  was  used  to  covalently  trap  low  molecular  weight  ("SMALL")  αS  oligomers  in  their  native  conformations.  Several  "SMALL"  αS  oligomeric  species  were  purified  using  tandem  size-exclusion  chromatography.  We  next  investigated  the  structural  and  functional  features  of  αS  oligomers  with  biophysical  characterization  including  circular  dichroism  and  transmission  electron  microscopy,  seeding  propensity  with  ThT  assay,  and  their  cytotoxicity  with  SH-SY5Y  cell  line.Tuberculosis  is  the  second  leading  infectious  killer  and  ranks  the  13th  on  leading  cause  of  death  worldwide.  The  emergence  of  new  strains  that  are  resistant  to  existing  antibiotics  underscores  the  urgent  need  for  the  discovery  and  development  of  novel  antibacterial  treatments.  Chapter  3  introduced  the  development  of  high  throughput  screening  assay  for  the  assistance  of  inhibitor  discovery  of  FadD32,  an  essential  and  vulnerable  target  in  Mycobacterium  tuberculosis  survival  catalyzing  biosynthesis  of  mycolic  acids.  This  fluorescence  polarization-based  assay  platform  is  simple,  robust,  and  compatible  with  automation,  making  it  suitable  for  high-throughput  screening.  By  facilitating  the  discovery  of  antimycobacterial  agents,  this  platform  has  the  potential  to  accelerate  efforts  in  overcoming  drug  resistance  and  developing  effective  treatments  for  tuberculosis.Biotin  is  an  essential  cofactor  in  Mtb  survival,  making  enzymes  involved  in  its  biosynthesis  pathway  valuable  targets  in  new  antibiotics  discovery.  Biotin  synthase  (BioB)  is  a  radical  S-adenosylmethionine  (SAM)  enzyme,  catalyzing  the  last  step  synthesis  of  biotin  from  desthiobiotin  (DTB).  Chapter  4  demonstrated  that  unlike  BioB  in  E.coli,  activation  of  the  function  of  BioB  in  Mtb  (BioB.tb)  requires  a  small  (8.6  kD)  protein,  BsaP,  to  be  active.  That  BsaP  is  required  for  growth  without  extrabacterial  biotin  was  predicted  by  transposon  sequencing  (TnSeq)  and  confirmed  by  deleting  bsaP  in  Mtb  and  Mycobacterium  smegmatis.  Chemical  genetic  complementation  mapped  the  function  of  BsaP  to  the  conversion  of  DTB  into  biotin.  The  reliance  of  BioB.tb  on  BsaP  was  also  confirmed  biochemically  with  in  vitro  assays.  Homologs  of  BsaP  occur  in  many  actinobacteria  and  our  findings  open  new  opportunities  to  seek  BioB  inhibitors  to  treat  infections  with  Mtb  and  other  pathogens.
■590    ▼aSchool  code:  0130.
■650  4▼aPharmaceutical  sciences
■650  4▼aNeurosciences
■650  4▼aBiology
■650  4▼aMedicine
■653    ▼aα-synuclein  protein
■653    ▼aParkinson's  Disease
■653    ▼aAmyloid  proteins
■653    ▼aNeurodegenerative  disorders
■653    ▼aChromatography
■690    ▼a0572
■690    ▼a0564
■690    ▼a0317
■690    ▼a0306
■71020▼aUniversity  of  Minnesota▼bMedicinal  Chemistry.
■7730  ▼tDissertations  Abstracts  International▼g87-02B.
■790    ▼a0130
■791    ▼aPh.D.
■792    ▼a2023
■793    ▼aEnglish
■85640▼uhttp://www.riss.kr/pdu/ddodLink.do?id=T17366030▼nKERIS▼z이  자료의  원문은  한국교육학술정보원에서  제공합니다.

미리보기

내보내기

chatGPT토론

Ai 추천 관련 도서