MARC

 008260311s2025        us                                    eng  d
■001000017361121
■00520260311091538.5
■006m          o    d                
■007cr|nu||||||||
■020    ▼a9798270228958
■040    ▼aMiAaPQD▼beng▼cMiAaPQD▼erda
■082    ▼a541.38
■1001  ▼aDunham,  Sean  Duncan▼eauthor.
■24510▼aEnhancing  Characterization  of  Intact  Proteins  by  UVPD  Mass  Spectrometry  and  Charge  Reduction  Reactions  ▼cSean  Duncan  Dunham
■260    ▼a[Sl]▼bThe  University  of  Texas  at  Austin▼c2025
■264  1▼aAnn  Arbor▼bProQuest  Dissertations  &  Theses▼c2025
■300    ▼a1  electronic  resource  (316  pages)
■336    ▼atext▼btxt▼2rdacontent
■337    ▼acomputer▼bc▼2rdamedia
■338    ▼aonline  resource▼bcr▼2rdacarrier
■500    ▼aSource:  Dissertations  Abstracts  International,  Volume:  87-06,  Section:  B.
■500    ▼aAdvisors:  Brodbelt,  Jennifer  S.    Committee  members:  Lin,  Yi-Chih;  Natividad,  Luis;  Brenna,  Thomas  J.
■5021  ▼bPh.D.▼cThe  University  of  Texas  at  Austin▼d2025.
■520    ▼aAccess  to  high  resolution  mass  spectrometers  and  high  energy  modes  of  activation  such  as  electron-  and  photon-based  modalities  have  enabled  wider  adoption  of  top-down  methodologies,  or  strategies  that  allow  the  study  of  intact  proteins.  However,  interpretation  of  MS/MS  spectra  of  large  proteins  remains  difficult  owing  to  spectral  congestion,  charge  capacity  limitations  of  ion  trapping  mass  spectrometers,  and  other  challenges.  This  dissertation  describes  new  strategies  to  improve  the  acquisition  and  analysis  of  MS/MS  of  intact  proteins,  particularly  focusing  on  ultraviolet  photodissociation  (UVPD),  an  ion  activation  method  that  causes  extensive  fragmentation  of  proteins.  For  UVPD  of  intact  proteins,  a  single  laser  pulse  is  typically  used  to  avoid  secondary  dissociation  of  fragment  ions  that  occurs  when  multiple  pulses  are  employed.  Consequently,  a  large  amount  of  the  precursor  ion  population  remains  undissociated.  Notably,  exclusion  of  the  survivor  precursor  ion  population  through  gas-phase  fractionation  can  improve  the  signal  of  fragment  ions,  an  outcome  related  to  alleviation  of  charge  capacity  limitations  of  the  C-trap  of  the  orbitrap  mass  spectrometer.  UVPD  mass  spectra  of  intact  proteins  are  thus  fractionated  following  UVPD  in  order  to  exclude  the  precursor  ion,  ultimately  yielding  gains  in  fragment  ion  signal,  reduction  in  noise  levels,  and  enhancement  in  sequence  coverage.  In  addition,  spectral  congestion  can  hinder  confident  assignment  of  fragment  ions  and  may  be  addressed  by  proton  transfer  charge  reduction  reactions  (PTCR).  PTCR  was  explored  and  afforded  additional  gains  in  sequence  coverage.  Gas-phase  fractionation  and  PTCR  were  applied  on  the  liquid  chromatography  timescale  to  characterize  a  monoclonal  antibody  (mAb)  and  a  cysteine-conjugated  antibody  drug  conjugate  (ADC)  by  both  UVPD  and  electron  transfer  dissociation  (ETD).  The  complementary  nature  of  both  activation  methods  and  application  of  gas-phase  fractionation  and  PTCR  facilitated  comprehensive  characterization  of  mAb  and  ADC  heavy  chains,  allowing  unambiguous  localization  of  payloads  on  two  ADC  heavy  chain  positional  isomers.  Proteins  may  also  be  charge  reduced  by  alpha  particle  emission  or  source  activation,  allowing  the  accumulation  of  a  larger  precursor  ion  population  and  the  potential  for  less  dense  MS/MS  spectra  by  UVPD.  Although,  charge  reduction  prior  to  activation  by  UVPD  enhanced  sequence  coverage  at  low  charge  states,  sequence  coverage  was  maximized  at  high  charge  states  within  the  context  of  post  UVPD  PTCR  experiments.  These  outcomes  are  speculated  to  be  the  consequence  of  structural  compaction  at  low  charge  states.
■546    ▼aEnglish
■590    ▼aSchool  code:  0227
■650  4▼aAnalytical  chemistry
■650  4▼aBiochemistry
■650  4▼aBiophysics
■650  4▼aMolecular  chemistry
■653    ▼aIntact  proteins
■653    ▼aMass  spectrometry
■653    ▼aUltraviolet  photodissociation
■7102  ▼aThe  University  of  Texas  at  Austin▼bChemistry.▼edegree  granting  institution.
■7201  ▼aBrodbelt,  Jennifer  S.▼edegree  supervisor.
■7730  ▼tDissertations  Abstracts  International▼g87-06B.
■85640▼uhttp://www.riss.kr/pdu/ddodLink.do?id=T17361121▼nKERIS▼z이  자료의  원문은  한국교육학술정보원에서  제공합니다.

Preview

Export

ChatGPT Discussion

AI Recommended Related Books